药物溶出度试验，是评价口服固体制剂性能的重要试验。通过该试验，我们可以充分了解药物质量、处方以及工艺过程，最重要的是，可以评价药物的体内行为。

　　同时，我们可以通过一个已证明的能够预测体内行为的溶出试验，向管理当局申请豁免生物等效性试验，从而避开漫长而昂贵的临床阶段，极大地降低研发的时间和费用。

　　溶出试验的最简单定义为：衡量药物在特定条件下从制剂中释放入水性介质的速度和程度。

　　药物释放曲线，则是药物活性成分（API）性质、处方设计、工艺过程以及所选用的检测药物释放方法的化学和机械环境等因素共同作用的结果。

　　随着科技的发展，溶出速率的标定方法也日趋增多，但最常用的还是紫外可见分光光度法和带紫外检测器的高效液相色谱法。

　　在检测溶出速率时，使用紫外可见分光光度法的标定方法为吸收系数法。而对与高效液相色谱法检测溶出速率，我们有两种标定方法可以选择，即自身对照法和对照品对照法。

　　今天，我们就来好好聊一下这三种溶出度标定方法。

　　一、自身对照法

　　在现代药物检测工作中，随着药物种类的不断增多，药物的标准对照品也日益增多。但其实在实际工作中并不是所有药物都能及时获得对照品。甚至在有些时候，研发工作者为了不影响处方工艺开发进程，只能应用经标定的药物原料药作为对照品，而在实验室的条件限制下，所得到的原料药纯度多半只是一个参考值，而非真实值。

　　例1：某原料药的水分含量为 2.23%，液相色谱检测之后得出的杂质含量为 1.59%，那么此原料药的纯度为（100 %-2.23 %）?（100 %-1.59 %）≈96.2%， 这种情况下只能默认为此原料药中只有液相色谱能检测到的杂质、水分、和其本身。但实际上大多数原料药里面含有溶剂残留，炙灼残渣、重金属等物质，很少有原料药能够做到只有杂质、水分、和其本身。此时自身对照法的意义就显得格外耀眼。

　　自身对照法是以平均 1 片（粒）的含药量作为对照，测定每一片（粒）的溶出量，可排除含量的影响，达到考察制剂中原辅料性质、处方组成及生产工艺等方面的影响，可以更真实地反映药物在制剂中的溶出情况。

　　自身对照法的优点：a、无需对照品或标准品，检定方便；b、能够减少或消除药物辅料及复方制剂中其他组分对测定的干扰；c、节省对照品的用量。

　　自身对照法的缺点：a、仅反映药物个体的溶出性，完全不考虑样品的实际含量是否合格；b、对照项为 10 个样品的平均含量，有一定的变数而非恒定值，重现性相对较差。

　　那么自身对照法还哪些特点呢？下面我们来探讨一下。

　　（1） 自身对照法与含量无关

　　根据溶出度的定义，即药物从固体制剂中溶出的速度和程度，且与主药的晶型、粒度、处方、辅料、工艺等有关，可见溶出度并不考核主药的含量。

　　例2：某药品的含量为标识量的 50%，假设此药物完全溶出，则用自身对照法检测的溶出度为 100%，溶出度合格，并且符合溶出度的检测目的；而按对照品对照法或吸收系数法来标定结果，溶出度则为 50%， 即溶出度不合格。

　　后者的结果反而不合理，因为溶出是没有问题的只是主药的含量少而已。对比来看，自身对照法更能真实地反映药物的溶出情况。

　　（2） 自身对照法减弱了药物测定项目间的关联性

　　这样表述，并不是说所有检查项目间都必须具有关联性。有时候检测项目间有关联性更好，而有时候没有关联性，并不会影响我们对试验结果的判断。

　　就拿例2来说，若试验的目的是筛选出一种药品在其中可以完全溶出的溶出介质，显然按自身对照法检测出的结果为 100 %的溶出介质是可以的；但若用对照品对照法或吸收系数法检测，发现结果为 50 %，你还要判断是药品的主药含量不够，还是在此溶出介质中药品就是不能完全溶出。若是知道药品含量还比较好判断，若不知道，岂不是还得检测含量确认一下？是不是好麻烦？

　　二、对照品对照法

　　在项目最初期，如处方工艺开发阶段，筛选溶出介质时，溶出度的标定用自身对照法较为方便，而当项目的处方工艺、溶出介质等确定后，还是用对照品对照法较为合理，因为此时我们不仅要求药品的溶出度合格，还要求药品的含量也必须合格。

　　选用对照品标定法得出的溶出度结果可以间接反映含量，这也有利于我们排查一些异常结果背后的原因。

　　例3：同一批样品的溶出度检测结果均为 100 %，而含量检测结果均为 95 %，引起这种结果的原因，可能是样品的主成分提取不完全，或检测含量时制备的对照品不合格，绝不是样品本身含量低。所以在这时我们更倾向于选择对照品对照法。

　　对照品对照法其实就是我们所说的外标法（虽然外标法和内标法都是比较准确的定量方法，但在溶出度的检测这一块我们不用内标法，因为溶出度样品比较多，要用内标法要耗费大量的时间，而且溶出结果的准确度并没有含量要求高）。

　　外标法是用待测组分的纯品作为对照品，以对照物质和样品中待测组分的响应信号相比进行定量的方法。此法可分为工作曲线法及外标一点法等。

　　工作曲线法，是用对照物质配制成一系列浓度的对照品溶液确定工作曲线，求出斜率、截距。

　　在完全相同的条件下，检测样品溶液与对照品溶液，对照品溶液的进样体积应与样品溶液相同，根据待测组分的响应值，从标准曲线上查出其浓度，或用回归方程计算（工作曲线可以直接在液相色谱仪上建立，然后对所有样品进行处理，这样可以很直观地得到样品的浓度）。

　　工作曲线法也可以用外标两点法代替，通常截距应为零，若不等于零，说明存在系统误差。

　　工作曲线的截距为零时，可用外标一点法（直接比较法）定量。

　　外标一点法是用一种浓度的对照品溶液对比测定样品溶液的含量。外标法不是把标准品加入到被测样品中，而是在与被测样品相同的色谱条件下单独测定，把得到的色谱峰面积与被测组分的色谱峰面积进行比较求得被测组分的含量。

　　外标物与被测组分为同一物质但要求它有一定的纯度，分析时外标物的浓度应与被测组分浓度接近， 以提升定量分析的准确性。

　　此法的特点是操作简单，计算方便，不需测量校正因子，适用于自动分析和大量分析样品。但外标法也有缺点，即仪器的重现性和操作条件的稳定性必须保证，否则，会影响试验结果。

　　三、吸收系数法

　　吸收系数法定量的原理，是测定所配供试品溶液在规定波长处的吸光度，根据被测成分的吸收系数计算其含量。

　　其特点是对仪器要求高，使用该法时，应注意仪器波长、空白吸收的校正、吸光度准确度的检定和杂散光的检查；且无需对照品，方法简便。

　　用本法测定时，以规定条件下的吸收系数计算含量，吸收系数通常应大于 100，并注意仪器的校正和检定。

　　吸收系数法测定溶出度优点是简单方便，常用于制剂的含量测定，无需配制对照品溶液；缺点是准确度不如对照品对照法，如果杂质或辅料在该波长处有吸收，则测出结果偏高。

　　四、总结

　　自身对照法、对照品对照法、吸收系数法都是定量的手段，至于一种方法好与不好，不能一概而论，每个试验都有其特定的试验目的和要求，我们要结合自身需求，选择高效、快速、合理的定量方法。

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