众所周知，口服固体制剂的溶出方法开发是个争论不休的大课题，如何以体外溶出行为评价体内行为，我们今天姑且不聊，主要聊一聊溶出度与溶出曲线方法学验证的具体内容。而溶出的检测方法常用的是紫外-可见分光光度法(UV法)和高效液相色谱法(HPLC法)两种。本文主要适用于口服固体制剂以HPLC法检测溶出度和溶出曲线需要进行的方法学验证试验，UV法需要验证的内容大同小异，可根据实际情况加以调整，大体原则不变，现将具体内容汇总如下：

　　1.色谱条件的确定

　　溶出度的检测方法，首选以含量测定方法为原点进行优化。若含量测定方法合适，则可与其方法一致，省去一部分开发内容。但当含量测定采集时间较长时，建议优化方法，使溶出采集时间尽量短，否则一条溶出曲线的测定时间将非常漫长，在稳定性过程中的检测将更令人等到头秃，劳民伤财的事儿咱尽量不干。

　　值得关注的是，由于溶出曲线各种介质与含量测定所采用的溶剂不同，供试品溶液浓度也并不一致，故峰型柱效可能会有变化，故开发过程中应关注系统适用性要求。

　　另外有一种情况，主成分在某种溶出介质中很不稳定，产生降解杂质，需要将降解杂质含量与溶出量加和计算，此时的测定方法应能将降解杂质峰与主成分峰完全分离，方不影响测定结果。

　　2.分析方法的验证

　　按照惯例，先上一个汇总表概括说明验证内容：

注：测定中各溶出介质均需进行方法学验证(耐用性可酌情减少实验，有时仅考察标准介质就具有一定的代表性了)。

　　下面，将方法学验证中的各项试验要求展开详述。

　　2.1专属性

　　目的：考察空白溶剂、空白辅料与待测主成分峰之间的分离情况。空白溶剂、对照品溶液、供试品溶液：按拟定标准配制。空白辅料溶液：空白辅料按处方比例混合后，按拟定标准配制(需考察胶囊壳等基质)。需考虑图谱中肉眼可见的较大降解杂质与主成分的分离情况，必要时加和计算溶出量。溶出度不要求考虑普通杂质与主成分的分离情况，也不要求进行强制降解试验。

　　2.2溶液稳定性

　　目的：考察对照品溶液和供试品溶液配制后的稳定时间，为工艺验证、批检验、稳定性考察以及上市后的溶出度与溶出曲线测定提供依据。系统适用性溶液视情况考察，对照品溶液与供试品溶液必须考察。

　　注意：溶液稳定性的考察时间也应针对具体情况，如采集时间较长，考察时间也应延长，目的是使后续检验更方便。当溶液不稳定时，重复考察避光条件或冷藏条件下是否稳定，视情况而选择规定溶液稳定性的考察时间。

　　2.3定量限

　　目的：为确保分析方法测定供试品含量的灵敏度。

　　定量限的概念：是指样品中被测物能被定量测定的最低量，其测定结果应具有一定的准确度。定量限体现了分析方法是否具备灵敏的定量检测能力。将对照品溶液逐级稀释，当稀释至信噪比约为10时，此时浓度可作为定量限浓度。溶出方法学并不强制要求做检测限。

　　注意：定量限结果受色谱系统影响较大，如色谱柱、流动相、色谱仪的状态，甚至次日试验的结果会与前一天不同，在这种情况下，若定量限浓度较低，应换用色谱系统再次测定，以确保方法的灵敏度。

　　2.4线性与范围

　　目的：在规定的浓度范围内，测定响应值(峰面积)与待测组分浓度呈比例关系的程度。敲黑板——峰面积与浓度呈线性关系，是外标法的前提。配制一份对照品母液，从中稀释配制成一系列不同浓度的线性溶液，至少制备5份(建议浓度点的总数为奇数)，以测得的响应信号对待测物的浓度作图，检查是否呈良好的线性关系。

　　溶出度的线性溶液浓度要求：推荐为20%~150%。对于缓释制剂的溶出度，推荐为0~150%。注意线性溶液的最低浓度应大于定量限浓度，并应涵盖溶出曲线测定的最低浓度点。线性的浓度点尽量均匀分布。

　　2.5仪器精密度

　　目的：为保证仪器每次所测对照品溶液峰面积均一致，以确保结果的准确性，设计仪器精密度试验。取对照品溶液，连续进样6次。考察保留时间和峰面积的RSD%。

　　2.6回收率

　　目的：考察采用拟定方法测定结果与真实值或参考值接近的程度，也叫做回收率试验。用至少测定6份结果进行评价，或设计3种不同浓度，每个浓度平行配制3份。按照拟定质量标准配制空白溶剂、对照品溶液。

　　回收率供试品溶液：按处方比例混合的空白辅料+主成分对照品，再按照拟定质量标准配制溶液。不同于含量测定，溶出曲线过程中会涉及到较低浓度点，故回收率推荐设计较低浓度，保证在溶出行为测定的整个过程中，该方法都是较为准确的。回收率验证的范围必须囊括100%浓度水平。浓度范围一般要求为限度的±20%，高浓度点可适当调整至110%。回收率结果报告表格推荐内容如下：

　　2.7耐用性

　　针对耐用性，若涉及到的各溶出介质都去做一遍，工作量就过于庞大了。故推荐至少考察标准介质中的耐用性即可，其他介质视情况考察。

　　(1)溶出方法的耐用性

　　目的：考察溶出条件发生微小变化时，各时间点溶出量的变化情况。

　　还是列表说明推荐的变动条件：

　　根据品种特点考察耐用性，推荐但不仅限于上述变动条件。还有很多需要注意的方面，比如表面活性剂的浓度和不同厂家、不同缓冲液浓度、配制介质的水的脱气条件等，都是需要研究者在试验过程中予以关注的细节。

　　(2)测定方法的耐用性

　　这一个模块的内容与含量测定耐用性要求基本一致。

　　目的：考察色谱条件发生微小变化时对测定结果的影响。

　　按照拟定标准配制空白溶剂、对照品溶液和供试品溶液(系统适用性溶液视情况配制)，计算不同条件下供试品的含量测定结果，关注系统适用性是否符合标准要求(有时方法中并不拟定配制系统适用性溶液，而是规定主峰理论板数和拖尾因子等，也要相应关注和统计)

　　同样放一张表格，将耐用性试验内容和结果要求直观呈现如下：

　　耐用性考察的内容可能还有很多，请各位根据实际情况增减。另外，有时几个条件同时变化的情况下是否耐用，也是需要考察的。但考察叠加条件工作量较大，可自行选择较为重要的条件进行考察。耐用性试验时，观察峰型和结果的变化趋势，后续检验一旦出现问题，可以通过现象推测偏差原因，及时解决问题。

　　注意：变化不同色谱条件时，切记根据需要延长采集时间。当变动条件后测定结果与正常条件基本一致，且系统适用性指标符合标准规定，即可下测定方法耐用的结论。

　　2.8批内均一性和批间均一性

　　在海棠君看来，这两项指标既是检验企业产品的标杆，同时也是检验溶出方法是否精密的标杆。批内均一性：取同一批次产品的12个剂量单位(有时6个剂量单位也能够满足考察要求，比如快速溶出等情况)，测定溶出曲线，计算各取样时间点的RSD值。其中，早期的一些取样时间点(如5min)，要求RSD≤20%;其他时间点，要求RSD≤10%。批间均一性：取不同批次产品的12个剂量单位(有时6个剂量单位也能够满足考察要求，比如快速溶出等情况)，测定溶出曲线，比较各批次的溶出曲线是否相似。

　　3.不得不提到的注意事项

　　3.1质量标准写法

　　中国药典2015年版二部中所载各品种，即便是缓释制剂，对这一项检查也不再写成“释放度”而是写成“溶出度”，因此在撰写药典版质量标准时，推荐按照药典规范写法。

　　3.2方法学验证的范围

　　验证范围包括但不仅包括该品种的各常规介质。

　　若该制剂涉及到剂量倾泻的考察，应进行加入一定量乙醇介质中的溶出方法学验证。

　　若需考察该产品在生物介质中的溶出行为，则应进行生物介质中的溶出方法学验证。

　　总之，有的放矢，有据可依，检测做了什么，方法就需验证什么。

　　3.3配制过程中的溶剂问题

　　当主成分在相应溶出介质中难溶时，在方法学验证中可使用少量有机溶剂先使其溶解(线性、回收率等试验)，再用相应溶出介质稀释定容，但最终进样分析的供试品溶液中，有机溶剂的比例应不超过总体积的5%。

　　后 记

　　前几天跟单位里面一位同事前辈聊天，这位老师说，有些人能影响一群人，有些人能影响几个人，于他而言，只要有一个人听了他的方法，并且照做了，他就会不厌其烦地讲下去。海棠君不禁在寒风紧密的冬夜里听得热血沸腾。写文章，和日常工作中带小团队，好像大抵都是如此。我以怎样的姿态去倾注，对方就会以怎样的姿态来阅读。下笔写出的文章总要有品格，倾心组建的团队也要有风格。但愿生活和工作都能够一直如此继续下去——全情贯注，严于律己，求同存异，善莫大焉。

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