编者荐语：

　　这篇文章是作者根据亲身经验呕心沥血写出来的，文字生动，并附有图片，不懂液相色谱仪的小白读完，一定会少走很多弯路。

　　对于面前这个庞然大物（不是体积而是价格），我是十分的害怕（主要是对我来说太贵了，轻易不敢对它出手），但又很想征服它，看着它这身板，对于小白来说真的是无从下手呀，那也别着急，我们先不对它下手，我们来摸摸它的底细，常言道“知己知彼，才能百战不殆”！看看它这好几个盒子都是干什么用的。

　　一、液相色谱的使用原理

　　要想能操作它，我们得先知道它是通过什么原理来工作的，液相色谱的工作原理呢我相信就算你没怎么接触过检测，只要学过分析化学的人呢多多少少会知道一点（为啥是多多少少呢，就看大学的你上课找没找周公下过棋了）。

　　我们将处理好的样品溶液经进样器进入流动相，随着流动相进入色谱柱，由于样本溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的“吸附-解吸”的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样本浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式输出检测结果。工作原理搞清楚了，接下来我们看看它的组成。

　　它呢有五个最基本的组成部分，第一个是输液系统（输液泵），第二个是进样系统，第三个色谱柱，第四个检测系统，第五数据记录和处理系统（电脑工作站）。接下来我们来一一揭开它们神秘的面纱。就是这样式的（上面全是英文，对于英文不好的我第一步先查这机器上面每一个单词的意思）：

输液系统中最主要的核心呢就是输液泵。

　　我面前的这个家伙采用的是双柱塞往复式串联泵，绿色圈圈那个就是了，它是由两个结构相同的泵头串联而成，因为凸轮的凸点差180°，所以两根柱塞杆的运动一直都是相反的。

　　两个泵头一个连接单向阀（简称1号泵），且连接单向阀的泵头储液腔体积是没有连接单向阀泵头（简称2号泵）的一倍，当整个机器开始运行时，1号泵泵出的液体一半进入色谱系统，一半在2号泵中储存起来，当1号泵再去吸液时，2号泵里的液体进入色谱系统，这样往返的循环，使得色谱系统内的流动相脉动减小，流量平稳。在它傍边呢还有一个排气阀，就是红色圈圈那个，它主要是为了排出管路中的气泡，以免出现压力和流量不稳。

　　进样系统是由手动进样阀和进样针组成。手动进样阀长这个样子，它的背面呢有六个连接点如下图所示：

　　1号和4号连接定量环，2号连接输液泵，3号口连接我们的色谱柱，5号是放空管，6号是废液管。当进样阀手柄位处于进样(Load)位置时，样品从进样针注入进样孔后进入进定量环，定量环充满后，多余样品从放空孔排出。我们把手柄转动至进样(Inject)位置时，阀与液相流路接通，由泵输送的流动相冲洗定量环，带动样品进入色谱柱中。（借鉴了网上的图片）

　　接下来是我们的色谱柱，一般情况下它都在柱温箱里，今天我可是看到它的真实面貌了。就这么细细的一根，放在这里好像有点不美观呢，所以我们依然很贴心的给它配备了柱温箱：

　　还有我们的检测器，是SPD-10A紫外检测器

　　它的工作原理是基于光的吸收定律-朗伯比尔定律。此检测器配备的是氘灯（查了很久才知道D灯代表氘灯），波长在190-600nm。它是由氘灯发出的光，通过一系列的光路组件后形成单一波长的平行光束，当光束透过流动池时，若流动相不吸收光，则样液吸收度A与吸光组分的浓度C和流动池的光径长度L成正比。

　　最后呢就是我们的工作站啦，准备一个单独的电脑，在电脑上安装上我们的N2000色谱数据站，万幸的是工作站是中文的，我们可以轻松操作。

　　好了，液相色谱的组成部分以及原理我们学习完了，下面我们就要把它们连接起来（这抽象的画风，真令人尴尬，凑活看吧），投入使用啦。

　　二、组装液相色谱仪

　　了解完了液相色谱仪，现在我们来按照它们的连接顺序把他们组装在一起，第一次连接设备，想想还有点兴奋呢。因为我们的工作站已经安装好了，不需要安装工作站，只需将输液系统、进样系统、色谱柱和检测系统连接在一起。首先把进样阀安装在输液泵右边进样阀托架红色圈圈处。

　　安装之前进样阀上要安装上定量环，接在1号和4号位，5和6的位置连接两个排气管，两个排气管的末端要在同一水平高度，目的为了防止针道虹吸。进样阀固定好后将排气阀上方的管口接到我们的进样阀的2号口。

　　接下来我们要把色谱柱连起来了，按柱管上标示的流动相流向，将色谱柱的入口端通过连接管与进样阀的3号口相连，色谱柱出口连接我们的紫外检测器。紫外检测器的另一个端口接入废液桶中。

　　三、配制流动性

　　连接完成后，我们就要将它投入使用啦，在使用之前我们要做一些小小的准备，我们的流动相还没准备就绪呢，正好有客户让检测异丙威，那就按照它的色谱条件来准备我们的流动相，它需要用的甲醇和水（7：3）来做流动相，但是只有一个管口，怎么办？

　　以前用的别的仪器都有四个呀，这咋才一个，是不是有一个管子没连上，我心里不断地嘀咕着（没好意思张口问老大），便转着圈地找另一个管子，这时老大问我：“只有一个进液管，却告诉你流动相有两种，你怎么办？”啊！真的只有一个呀，亏我找了那么久，我弱弱地回答了一句，再安装一个泵？老大说这也是一个办法，有没有省力省钱的办法？

　　我说要不把管子换了，换成Y型管，回答完我自己都笑了，老大说你仔细看看流动相要求的比例，你觉得可行吗？啊，我明白了，按照比例先混合好，然后就可以用一个管来进相了。

　　我们将甲醇（色谱纯）和超纯水按照7：3的比例混合好，在流动相过滤装置中进行过滤，将过滤后的流动相转移到溶剂瓶中，转移的时候要注意不要对过滤后的流动相造成污染。

　　将溶剂瓶放入超声波脱气机中脱气30min，脱气时溶剂瓶的盖子轻扣在溶剂瓶上。脱气完成后擦干溶剂瓶将连接沉子的进样管插入流动相中。它就是沉子，也就是溶剂过滤头，或叫吸液过滤头，主要作用是过滤流动相中可能存在的颗粒性杂质。

　　四、开机设置参数

　　流动相准备好我们就可以开机了，虽然我们已经连接好了仪器，但是开机前还要检查一下各部件的数据线、电源线、输液管道是否连接正常。我们先打开电源，再打开泵电源、检测器电源。待机器自检过后打开电脑显示器和主机。

　　接下来我们设置参数，按下检测器的（func）功能键，之后输入波长按确认键（enter）确认后，按（CE）退到初始屏幕。

　　当泵显示初始屏幕时我们只需设定流速（因为只有一个泵，流动相已经按比例配置好了，在此不用设定流动相比例），按下功能键，输入流速确认后，按（CE）退到初始屏幕即可。

　　设置完参数我们开始进行排气泡，将排气阀逆时针转动180°，按下清除键（purge），此时泵（pump）灯开始亮，开始排气泡，气泡排净后经排气阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。排气时流动相是经过泵、排气阀直接进入废液桶的哦。

　　排气结束后冲洗系统，打开我们的Z2000-色谱工作站，它有两个通道，通道1我们用来做气相色谱，在做液相的时候我们选用通道2，按照实验条件设定好方法后，点击数据收集，查看基线。并观察我们的泵压波动范围，超过1MP时，色谱柱前管路仍有气泡，这时我们需要重新排气泡。当我们的基线漂移小于0.01mV/min，噪声也小于0.001mV时系统达到平衡状态，此时可以进样。

　　进样前需将检测器调零，按检测器面板上zero键，并点击工作站的零点校正，来校正基线的零点，校正完成后点击查看基线是零点校正恢复正常状态。系统组装连接完成啦，接下来我们要做完整的试验啦~

　　以下文章来源于液相色谱之家 ，作者夏沫

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